Role of MyD88-adaptor-like gene polymorphism rs8177374 in modulation of malaria severity in the Pakistani population

Abstract Introduction: The present study was designed to investigate the association between rs8177374 polymorphism and malaria symptoms due to exposure of Plasmodium vivax and Plasmodium falciparum. Materials and methods: A total of 454 samples were included in the study (228 malaria patients and 226 healthy individuals). Malaria patients, divided into P. vivax and P. falciparum groups on the basis of the causative species of Plasmodium, were categorized into mild and severe on the basis of clinical outcomes according to WHO criteria. Healthy individuals were used as controls. Allele specific PCR based strategy was used for the identification of rs8177374 SNP. Results: MyD88-adaptor-like gene polymorphism was associated with susceptibility to malaria (p < 0.001). C allele frequency (0.74) was higher in the population compared to T allele frequency (0.26). CT genotype increased the susceptibility of malaria (OR: 2.661; 95% CI: 1.722-4.113) and was positively associated with mild malaria (OR: 5.609; 95% CI: 3.479-9.044, p = 0.00). On the other hand, CC genotype was associated with severe malaria (OR: 3.116; 95% CI: 1.560-6.224, p = 0.00). P. vivax infection rate was higher in CT genotype carriers compared to other genotypes (OR: 3.616; 95% CI: 2.219-5.894, p < 0.001). Conclusion: MyD88-adaptor-like/TIR domain containing adaptor protein polymorphism for single nucleotide polymorphism rs8177374 is related with the susceptibility of malaria.

Avaliação das células B de memória na malária por Plasmodium vivax: contribuição no entendimento da imunidade humoral de longa duração

A invasão dos eritrócitos pelo parasito da malária garante o estabelecimento da infecção e é responsável pelos sintomas clínicos da doença. Dessa forma, existe um grande interesse no desenvolvimento de vacinas que possam induzir a produção de anticorpos com capacidade de bloquear a invasão dos eritrócitos e consequentemente interromper o ciclo biológico do parasito. No caso do Plasmodium vivax, a invasão do eritrócito é altamente dependente de uma proteína do complexo apical do parasito --Duffy binding protein II (DBPII)-- que reconhece o antígeno de grupo sanguíneo Duffy--DARC (Duffy Antigen Receptor for Chemokines) -- na superfície dos reticulócitos humanos. Embora a importância dos anticorpos na imunidade contra a malária esteja bem estabelecida, os fatores que estão diretamente envolvidos no mecanismo de desenvolvimento de células B de memória (MBCs) de longa duração são pouco conhecidos, o que faz-se necessário o conhecimento, especialmente para o desenvolvimento de uma vacina contra essa doença. No presente trabalho avaliamos a resposta imune adquirida contra o P. vivaxem uma população exposta uma única vez a esse parasito em um surto ocorrido na região metropolitana deMinas Gerais, após 12 anos da infecção

A persistência de anticorpos contra as proteínas de fase sanguínea de P. vivax(MSP1-19 e DBPII), além dos protótipos vacinais baseados em DBPII(DEKnull e DEKnull2) foram avaliados por sorologia convencional (ELISA). Foram avaliadas também, células B de memória (MBCs) específicas diferenciadas em células secretoras de anticorpos (ASCs) IgG+ e IgM+ foram avaliadas pelo ensaio de ELISpot. Além disso, no presente trabalho foram avaliadas as MBCs circulantes e anticorpos anti-P. vivax(MSP1-19, variantes e protótipos vacinais de DBPII) em residentes de área endêmica, com infecção aguda e não-aguda. Os resultados mostram que, embora os anticorpos produzidos após uma única e curta exposição ao P. vivax são de curta duração, uma vez que, anticorpos específicos não foram observados para nenhuma das proteínas avaliadas nesse trabalho após 12 anos da ocorrência do surto, as MBCs específicas aos antígenos de P. vivax ainda são detectadas.De forma interessante, o protótipo DEKnull2 apresentou alta imunogenicidade com 52% de produção de ASCs IgG+ em indivíduos expostos ao surto. Além disso, observamos que a resposta de MBCs IgM+ específica para DBPII e DEKnull2 foi mais robusta que a encontrada para MBCs IgG+. Com relação aos indivíduos de área endêmica podemos observar que o acúmulo de exposição ao P. vivax leva a expansão de MBCs atípicas. Este trabalho permitiu observar que uma única exposição ao P. vivax é capaz de induzir a produção de MBCs de longa duração contra a DBPII e seus protótipos, e que apenas a exposição contínua a esse parasito é capaz de levar ao aumento das MBCs atípicas

Modulação da resposta imunológica por moléculas regulatórias durante a infecção pelo Plasmodium vivax / Modulation of the immune response by regulatory molecules during Plasmodium vivax infection

No Brasil a malária ainda é considerada um grande problema de saúde pública e o Plasmodium vivax é considerado o principal agente causador, com 88% de incidência. Sabe-se que a resposta contra esse parasito depende da resposta de células T e a ativação dessas envolve, além da sinalização através do receptor de célula T (TCR), a sinalização secundária, como por exemplo, a desencadeada por moléculas reguladoras. A combinação das interações mediadas por esse conjunto de moléculas regula a extensão, qualidade e duração da ativação de células T e, portanto, influencia significativamente o curso das respostas imunes. O objetivo desse trabalho é avaliar o padrão leucocitário, o perfil de expressão de receptores inibidores como morte programada-1 (PD-1), antígeno 4 associado ao linfócito T citotóxico (CTLA-4), domínios de mucina e imunoglobulina de célula T (TIM-3) e gene 3 de ativação linfocitária (LAG-3) em populações de células T, além da influencia da expressão destes receptores na modulação da produção de citocinas em pacientes infectados pelo P. vivax. Para isso, células mononucleares do sangue periférico (PBMC) foram coletadas de pacientes infectados pelo P. vivax em Porto Velho, RO e analisadas por citometria de fluxo. Os resultados demonstram que a infecção pelo P. vivax desencadeia aumento da expressão de receptores inibitórios em linfócitos T CD4+ e CD8+, principalmente em subpopulações de memória e em células de T reguladoras (Treg)

Importante mencionar que ensaios funcionais, utilizando-se anticorpos monoclonais específicos para CTLA-4, PD-1, TIM-3, confirmaram a função moduladora dessesreceptores levando ao aumento da produção de citocinas por células antígeno-específicas. As células Treg também apresentam capacidade prejudicada durante a malária. Apesar da expressão aumentada de PD-1, não foi estabelecido uma relação direta entre a expressão deste e da perda da modulação pelas Treg. No entanto, a expressão aumentada de PD-1 é coincidente com a diminuição da expressão de Foxp3 e Helios, e com o aumento de Tbet, e consequentemente com o aumento da produção de IFN-γ. Nossos dados corroboram nossa hipótese de que o aumento da expressão de receptores inibitórios durante a infecção pelo P. vivax prejudica funções efetoras de células T. Novas abordagens precisam ser exploradas para confirmarmos se a expressão de PD-1 por Treg é apenas um biomarcador de perda de função, ou se essa molécula influencia diretamente a função efetora dessa célula durante a malária vivax

Análise de polimorfismos em genes codificadores de moléculas envolvidas na homeostase do ferro como possíveis biomarcadores de recaída e/ou anemia durante a infecção por Plasmodium vivax

A malária é uma doença parasitária prevalente principalmente em regiões tropicais e subtropicais do mundo. Indivíduos infectados com Plasmodium vivax, mais prevalente espécie do parasito no Brasil, apresentam dentre outras características, a anemia como uma das principais complicações. Além disso, essa espécie é capaz de desenvolver hipnozoítos que podem levar ao reaparecimento dos sintomas em episódios denominados recaídas. No entanto, os mecanismos responsáveis pela ativação desses hipnozoítos ainda são desconhecidos. O metabolismo do ferro tem sido associado com o desenvolvimento de diversos organismos, inclusive Plasmodium, além de estar envolvido em distúrbios hematológicos, como a anemia. Assim, a hipótese investigada neste trabalho é que as moléculas envolvidas na homeostase do ferro podem ser utilizadas como biomarcadores de recaída e/ou de anemia através da análise dos polimorfismos C282Y e H63D no gene da hemocromatose (HFE) e C326Y/S no gene da ferroportina (FPN).

Os indivíduos analisados foram divididos segundo os dois grandes temas desse estudo: (1)indivíduos que tiveram uma ou múltiplas recaídas por P. vivax e (2) indivíduos anêmicos e não anêmicos infectados por P. vivax. A frequência do polimorfismo H63D identificada no grupo de múltiplas recaídas foi de 17%, enquanto que no grupo de uma recaída foi de apenas 2%. Não foi observada diferença significativa entre indivíduos anêmicos e não anêmicos para os polimorfismos HFE H63D e C282Y. Tanto no grupo de anemia quanto no grupo de recaída não foram encontrados os polimorfismos C326Y e C326S no gene da ferroportina. Os resultados obtidos nesse estudo evidenciam que o polimorfismo HFE H63D pode estar relacionado ao acúmulo de ferro nos indivíduos com múltiplas recaídas, sugerindo que esse polimorfismo pode ser considerado um biomarcador de múltiplas recaídas. Além disso, esses resultados abrem a perspectiva de realização de novos estudos que contribuam para a elucidação dos mecanismos que desencadeiam as múltiplas recaídas. Esses resultados podem inclusive contribuir para novas estratégias nos programas de eliminação da malária, como projetos de monitoramento de indivíduos que possuam predisposição ao acúmulo de ferro, e também resistência ao tratamento, principalmente nas áreas endêmicas.

Variabilidade genética de receptores plaquetários e componentes do inflamossoma: contribuição para a morbidade induzida por Plasmodium vivax

Plasmodium vivax tem sido reconhecido por sua capacidade de causar malária grave, oque torna prioritário os estudos acerca dos mecanismos patogênicos associados a essa espécie.Dado o caráter inflamatório exibido pela malária vivax, faz-se relevante estudar os fatoresgenéticos do hospedeiro vertebrado que podem influenciar o curso da doença. Nesse sentido,o presente trabalho investigou a influência da variabilidade genética de componentesplaquetários e do inflamossoma sobre a morbidade na infecção por P. vivax. Maisespecificamente, a primeira hipótese avaliada foi a de que alterações clínicas e hematológicasna malária vivax estão envolvidas com polimorfismos em genes de receptores plaquetários,relacionados ao aumento da adesão e/ou agregação das plaquetas: integrina α2 (C807T),integrina β3 (T1565C) e glicoproteína GPIbα (T-5C). A partir do estudo de aproximadamente200 indivíduos sintomáticos infectados por P. vivax, foi possível confirmar que ospolimorfismos do receptor para colágeno (α2) e do receptor para fator de von Willebrand(GPIbα) estão associados a duas das complicações mais frequentes na malária:trombocitopenia grave e anemia. A segunda hipótese investigada foi a de que polimorfismosem genes de componentes do inflamossoma – plataforma molecular capaz de desencadear aprodução de citocinas inflamatórias – estão associados à morbidade em pacientes infectadospor P. vivax. Nossos achados confirmaram essa hipótese e sugeriram que polimorfismos nosgenes de NLRP1, NLRP3 e CARD8 podem contribuir para as alterações clínicas ehematológicas observadas nos indivíduos estudados. Em conjunto, os dados aqui apresentadosconstituem a primeira demonstração de que a variabilidade genética de receptoresplaquetários e componentes do inflamossoma pode influenciar na patogenia da maláriacausada por P. vivax. Estudos futuros visando esclarecer o papel da cascata de coagulação inflamaçãona morbidade dessa doença fazem-se necessários.

Variabilidade genética de receptores plaquetários e componentes do inflamossoma: contribuição para a morbidade induzida por Plasmodium vivax / Genetic variability of platelet receptors and inflamossoma components: contribution to the morbidity induced by Plasmodium vivax

Plasmodium vivax tem sido reconhecido por sua capacidade de causar malária grave, oque torna prioritário os estudos acerca dos mecanismos patogênicos associados a essa espécie.Dado o caráter inflamatório exibido pela malária vivax, faz-se relevante estudar os fatoresgenéticos do hospedeiro vertebrado que podem influenciar o curso da doença. Nesse sentido,o presente trabalho investigou a influência da variabilidade genética de componentesplaquetários e do inflamossoma sobre a morbidade na infecção por P. vivax. Maisespecificamente, a primeira hipótese avaliada foi a de que alterações clínicas e hematológicasna malária vivax estão envolvidas com polimorfismos em genes de receptores plaquetários,relacionados ao aumento da adesão e/ou agregação das plaquetas: integrina α2 (C807T),integrina β3 (T1565C) e glicoproteína GPIbα (T-5C). A partir do estudo de aproximadamente200 indivíduos sintomáticos infectados por P. vivax, foi possível confirmar que ospolimorfismos do receptor para colágeno (α2) e do receptor para fator de von Willebrand(GPIbα) estão associados a duas das complicações mais frequentes na malária:trombocitopenia grave e anemia. A segunda hipótese investigada foi a de que polimorfismosem genes de componentes do inflamossoma – plataforma molecular capaz de desencadear aprodução de citocinas inflamatórias – estão associados à morbidade em pacientes infectadospor P. vivax. Nossos achados confirmaram essa hipótese e sugeriram que polimorfismos nosgenes de NLRP1, NLRP3 e CARD8 podem contribuir para as alterações clínicas ehematológicas observadas nos indivíduos estudados. Em conjunto, os dados aqui apresentadosconstituem a primeira demonstração de que a variabilidade genética de receptoresplaquetários e componentes do inflamossoma pode influenciar na patogenia da maláriacausada por P. vivax. Estudos futuros visando esclarecer o papel da cascata de coagulação inflamaçãona morbidade dessa doença fazem-se necessários...

Evaluación del efecto genotóxico en pacientes con malaria de una región de Colombia / Evaluation of the genotoxic effect of malaria in a cohort of patients in Medellín and Quibdó

Introduction: During malaria infection, both parasite and host are under the effects of oxidative stress due to the increased production of reactive oxygen species, which can induce DNA damage by its genotoxic effects. Objective: To evaluate genotoxic effects in human lymphocytes in a cohort of patients with malaria from Medellin and Quibdó. Methods: We performed an observational cross sectional study in 100 individuals with malaria and 100 healthy controls. Patients infected with Plasmodium consulting the Institute Colombiano of Medicina Tropical of Medellin and the Hospital Ismael Roldán Valencia of Quibdó were included. Genotoxic effects (genetic damage) was analysed by electrophoresis using alkaline single cell gel (Commet assay). Results: The average of tail length of malaria samples (26.9 ± 9.8) was significantly higher than of controls (14.8 ± 3.2) (p < 0.01). Conclusion: In our study population, malaria infection was associated with increased genotoxicity, while other variables such as smoking, antimalarial treatment, and occupation were not.

Introducción: Durante la infección de la malaria, tanto el parásito como el hospedero están bajo los efectos de estrés oxidativo, dado que se aumenta la producción de especies reactivas del oxígeno, las cuales pueden inducir daños en el ADN debido a su gran efecto genotóxico. Objetivo: Evaluar el efecto genotóxico en linfocitos humanos en una cohorte de pacientes con malaria de Medellín y Quibdó. Métodos: Se realizó un estudio observacional transversal en 100 personas con malaria y 100 controles sanos. Se incluyeron pacientes infectados con Plasmodium, que consultaron en el Instituto Colombiano de Medicina Tropical de Medellín y el Hospital Ismael Roldán Valencia de Quibdó. Se realizó una valoración transversal del efecto (daño genético) mediante electro-foresis en gel de células individuales (ensayo Cometa). Resultados: El promedio de longitud de la cola de los pacientes (26,9 ± 9,8) fue significativamente mayor que la media de los controles sanos (14,8 ± 3,2) (p < 0,01). Conclusión: Se evidenció en la población de estudio que la infección por malaria generó genotoxicidad, no así variables como tabaquismo, tratamiento antimalárico y ocupación.

Avaliação de marcadores moleculares na determinação da diversidade clonal nas infecções causadas por Plasmodium vivax

A malária é causada por parasitos do gênero Plasmodium, sendo P. vivax a espécie mais amplamente distribuída no mundo. Em áreas endêmicas, é frequente a coinfecção em um mesmo indivíduo por diferentes variantes de P. vivax,caracterizando uma infecção múltipla. Nestas infecções, diferentes proporções das variantes podem ser relevantes na competição entre elas, na virulência e na resistência às drogas. O objetivo deste trabalho foi de avaliar a eficiência dos marcadores moleculares na identificação de infecções múltiplas por P.vivax. Desta forma, foram selecionados seis marcadores (MS06, MS07, MSP-3α, MSP-1B2,MSP-1B10 e MN21) caracterizados por polimorfismos de tamanho analisados por eletroforese capilar. Para cumprir este objetivo foram usadas três estratégias metodológicas. Inicialmente dois diferentes alelos amplificados de cada loci foram clonados em plasmídeos para o estabelecimento de infecções múltiplas artificiais.

Na segunda estratégia foram realizadas misturas artificiais de DNAs de pacientes com parasitemia e níveis de leucócitos semelhantes. E por fim, realizou-se a genotipagem de isolados de P. vivax de 47 pacientes da Amazônia Brasileira, sendo 22 pacientes com infecção múltipla previamente identificada. Ao simularmos infecções múltiplas artificiais com diferentes proporções de cada clone ou DNA de paciente verificamos que: (1) para os MS e TR, alelos menores foram preferencialmente amplificados por PCR; (2) para ambos os blocos da MSP-1,ocorreu titulação nos resultados; (3) para MSP-3α não houve amplificação preferencial do alelo menor; (4) a utilização do critério de altura mínima de » da do pico predominante para a detecção dos alelos raros foi mais eficiente na detecção da multiplicidade de infecção. Na genotipagem de isolados de campo os marcadores MS06, MS07, MSP-1B10, MSP-3α e MN21 foram suficientes para detecção de100% das infecções múltiplas em pacientes. Assim, estamos propondo um painel demarcadores neutros (MS06, MS07 e MN21) e não neutros (MSP-3α e MSP-1B10) na detecção de infecções múltiplas utilizando o critério menos estringente para detecção dos alelos raros.

Estudo Molecular dos Parasitos Causadores da Malária Simiana no Centro de Primatologia do Rio de Janeiro, Brasil

No Brasil, foram descritas duas espécies de plasmódios simianos, Plasmodium brasilianum e Plasmodium simium, que são morfológica, genética e imunologicamente similares aos plasmódios humanos Plasmodium malariae e Plasmodium vivax, respectivamente. Plasmodium brasilianum infecta naturalmente macacos das famílias Cebidae, Aotidae, Pitheciidae e Atelidae, e foi detectado em uma ampla região geográfica. Já P. simium foi encontrado em uma área muito mais restrita, com descrições apenas nas regiões Sul e Sudeste, infectando naturalmente somente os gêneros Alouatta e Brachyteles, da família Atelidae. Apesar da malária no Brasil estar restrita como endemia à região amazônica, também são descritos casos da doença na região extra-amazônica, entre eles casos autóctones de malária,como os notificados em áreas de Mata Atlântica. Sugere-se que a manutenção destes casos envolva a presença de macacos infectados, que podem atuar como reservatórios da doença.Portanto, estudos moleculares das espécies de plasmódios simianos são fundamentais para o entendimento da real prevalência da doença, da dinâmica de transmissão, diversidade dos parasitos, assim como para esclarecer as relações filogenéticas entre as diferentes espécies de Plasmodium. O relato recente de casos autóctones no estado do Rio de Janeiro nos motivou a investigar a malária simiana na região.

O presente estudo foi realizado em parceria com o Centro de Primatologia do Rio de Janeiro (CPRJ), que está localizado no município deGuapimirim, onde foram relatados alguns destes casos autóctones. Foi realizada a extração de DNA a partir de amostras de sangue de 30 primatas do CPRJ para o diagnóstico molecular por Nested PCR e sequenciamento. O resultado do diagnóstico molecular indicou uma taxa de infecção de 30% nos primatas do CPRJ (9 amostras positivas), sendo 5 amostras positivas para P. brasilianum; 3 amostras positivas para P. simium e 1 amostra positiva para ambos os parasitos (infecção mista). O fragmento do 18SSU rRNA amplificado para o diagnóstico foi sequenciado e as sequencias obtidas de P. simium alinhadas com sequências de outras espécies de Plasmodium disponíveis no GenBank e utilizadas para reconstrução da árvore filogenética.A partir do alinhamento, fica evidente que o fragmento analisado é bastante conservado,mostrando uma alta similaridade genética entre P. simium e P. vivax. É importante ressaltar que o nosso estudo mostra de forma inédita a descrição de infecção malárica por P. simium nos gêneros Cebus e Sapajus. Essa descoberta é de suma relevância uma vez que ressalta apossibilidade de malária por P. simium em outras espécies de primatas não humanos, cujo impacto pode ser significativo para a epidemiologia da doença. A presença de símios infectados atuando como reservatórios da malária pode sugerir um caráter zoonótico da doença nas regiões de Mata Atlântica. Além disso, abre a possibilidade de utilizar estes macacos como novo modelo de malária vivax. Ademais, o maior entendimento da saúde dos animais selvagens é um ponto chave para a sua conservação. As doenças parasitárias e infecciosas estão envolvidas em eventos de declínios populacionais, e até mesmo de extinções de espécies. Logo, este estudo pode contribuir para a conservação dos primatas, especialmente aqueles que estão ameaçados de extinção, como alguns Cebus e Sapajus.

Estudo Molecular dos Parasitos Causadores da Malária Simiana no Centro de Primatologia do Rio de Janeiro, Brasil / Molecular study of Causing Parasites of simian malaria in Primate Center of Rio de Janeiro, Brazil

No Brasil, foram descritas duas espécies de plasmódios simianos, Plasmodium brasilianum e Plasmodium simium, que são morfológica, genética e imunologicamente similares aos plasmódios humanos Plasmodium malariae e Plasmodium vivax, respectivamente. Plasmodium brasilianum infecta naturalmente macacos das famílias Cebidae, Aotidae, Pitheciidae e Atelidae, e foi detectado em uma ampla região geográfica. Já P. simium foi encontrado em uma área muito mais restrita, com descrições apenas nas regiões Sul e Sudeste, infectando naturalmente somente os gêneros Alouatta e Brachyteles, da família Atelidae. Apesar da malária no Brasil estar restrita como endemia à região amazônica, também são descritos casos da doença na região extra-amazônica, entre eles casos autóctones de malária,como os notificados em áreas de Mata Atlântica. Sugere-se que a manutenção destes casos envolva a presença de macacos infectados, que podem atuar como reservatórios da doença.Portanto, estudos moleculares das espécies de plasmódios simianos são fundamentais para o entendimento da real prevalência da doença, da dinâmica de transmissão, diversidade dos parasitos, assim como para esclarecer as relações filogenéticas entre as diferentes espécies de Plasmodium. O relato recente de casos autóctones no estado do Rio de Janeiro nos motivou a investigar a malária simiana na região...

Avaliação de marcadores moleculares na determinação da diversidade clonal nas infecções causadas por Plasmodium vivax / Evaluation of molecular markers to determine the clonal diversity in infections caused by Plasmodium vivax

A malária é causada por parasitos do gênero Plasmodium, sendo P. vivax a espécie mais amplamente distribuída no mundo. Em áreas endêmicas, é frequente a coinfecção em um mesmo indivíduo por diferentes variantes de P. vivax,caracterizando uma infecção múltipla. Nestas infecções, diferentes proporções das variantes podem ser relevantes na competição entre elas, na virulência e na resistência às drogas. O objetivo deste trabalho foi de avaliar a eficiência dos marcadores moleculares na identificação de infecções múltiplas por P.vivax. Desta forma, foram selecionados seis marcadores (MS06, MS07, MSP-3α, MSP-1B2,MSP-1B10 e MN21) caracterizados por polimorfismos de tamanho analisados por eletroforese capilar. Para cumprir este objetivo foram usadas três estratégias metodológicas. Inicialmente dois diferentes alelos amplificados de cada loci foram clonados em plasmídeos para o estabelecimento de infecções múltiplas artificiais...

Plasmodium vivax MSP-3 beta gene as a genetic marker for the parasite detection in comparison with SRNA gene

The importance of accurate diagnosis of all of major diseases cannot be underestimated and efficient laboratory testing is vital to identifying and treating life-threatening illnesses including malaria. In this study, we compared the potential of one of merozoite surface protein genes, PvMSP-3 beta, for detection of Plasmodium vivax in blood samples by PCR with routinely used marker, ssrRNA gene. One hundred P. vivax microscopy-positive blood samples were simultaneously tested with two genetic markers, including PvMSP-3 beta gene and ssrRNA gene by PCR and nestedPCR method, respectively, and their sensitivity and specificity in detection of P. vivax was compared. An important difference was seen in sensitivity between the 2 genetic markers, 100% in case of ssrRNA gene vs. 95% of PvMSP-3 beta gene. The specificity of the two markers was same [100%]. Microscopic diagnoses of thick and thin blood smears was used as "golden standard" method. Due to critical importance of accurate detection of the parasite in malarious area, the PvMSP-3 beta gene cannot be a suitable marker for detection of P. vivax in blood sample by PCR. More investigations are needed to find other valid markers

Estudo da variabilidade de isolados de Plasmodium vivax de áreas endêmicas na Amazônia Brasileira / Study of the variability of isolates of Plasmodium vivax endemic areas in the Brazilian Amazon

A malária humana é causada por protozoários do gênero Plasmodium. Atualmente, mais de 2 bilhões de pessoas estão sob risco de contrair malária sobretudo em áreas tropicais e subtropicais. No Brasil, a malária está concentrada na região da Amazônia Legal, onde se registram mais de 99% dos casos, sendo cerca de 80% causados pelo Plasmodium vivax. Estratégias efetivas de combate ao parasito são essenciais para o controle da doença, e estas dependem do entendimento de diversos fatores como, por exemplo, a variabilidade genética e a estrutura populacional do P. vivax. Desta maneira, os marcadores moleculares são importantes ferramentas que podem auxiliar na elucidação destes aspectos biológicos do parasito. Contudo, poucos marcadores moleculares estão disponíveis para estudos populacionais de P. vivax, comparado ao P. falciparum, principalmente marcadores neutros ou quase neutros, ideais para esse tipo de estudo. Portanto, o objetivo deste trabalho foi identificar novos microssatélites em P. vivax e realizar análises de genética de população em isolados de cinco áreas da Amazônia Brasileira utilizando esses microssatélites e os cinco marcadores do tipo TR mais polimórficos descritos na literatura. Deste modo, uma busca in silico foi realizada utilizando o rascunho do genoma do parasito, e foram selecionados microssatélites com unidades repetitivas variando de 2 a 4 pares de base. Cada locus foi amplificado utilizando iniciadores específicos, incluindo os TRs cujos iniciadores foram baseados na literatura. O DNA molde para a realização da amplificação foi extraído de pacientes com infecção aguda de P. vivax.

Os produtos amplificados foram analisados em seqüenciadores automáticos de DNA utilizando programas de análise de tamanhos de fragmentos. As análises de genética de população foram realizadas utilizando vários pacotes computacionais. Ambos marcadores detectaram uma alta diversidade nas populações estudadas. Porém, algumas diferenças foram identificadas nas análises com cada tipo. de marcador molecular, dentre elas: as populações geneticamentes próximas foram diferentes juntamente com o padrão de desequilíbrio de ligação em cada população e a taxa de multiplicidade de infecção também variou entre os tipos de marcadores Além disso, foi possível, utilizando os microssatélites, estruturar as populações, o que não ocorreu utilizando os TRs. Por fim, foi possível perceber que os microssatélites se mostraram mais polimórficos, mais bem distribuídos pelo genoma do parasito e ainda. assim, o seu mecanismo de manutenção de variabilidade é conhecido, logo, eles aparentam ser mais aptos na utilização de estudos de genética de população de P. vivax

Duffy Binding Protein: análise da diversidade genética em isolados do plasmodium vivax da Amazônia Brasileira / Duffy Binding Protein: analysis of genetic diversity in plasmodium vivax isolates from the Brazilian Amazon

A invasão dos eritrócitos pelos merozoítos de Plasmodium vivax requer a interação da Duffy binding protein (PvDBP) com o receptor DARC na superfície dos eritrócitos humanos. Esta interação parece ser essencial na formação de uma junção irreversível entre as membranas do merozoíto e da célula do hospedeiro, uma etapa chave no processo de invasão dos eritrócitos. Diante disso, a PvDBP é considerada uma das mais importantes candidatas para compor uma vacina anti-P. vivax. O domínio de ligação da PvDBP (região II, PvDBPII) ao seu receptor é rico em resíduos de cisteína e constitui a região mais polimórfica da proteína. Embora a maioria dos aminoácidos envolvidos na interação PvDBPII-DARC seja invariável, a resposta imune que parece ser direcionada principalmente contra regiões polimórficas da PvDBPII é capaz de bloquear a interação proteína-receptor. Como esta diversidade genética pode comprometer a eficácia de uma vacina que inclua este antígeno, o objetivo principal deste trabalho foi caracterizar o padrão de diversidade do domínio de ligação da Duffy binding protein de isolados de P. vivax de várias regiões da Amazônia Legal brasileira. Utilizando ferramentas estatísticas adequadas, evidenciou-se o papel da recombinação e da seleção natural na geração e manutenção da diversidade genética na PvDBPII.

Em adição, a seleção positiva parece agir em codons individuais da proteína, preferencialmente nos epitopos de células T e B da PvDBPII. Em geral, estas regiões apresentam uma diversidade genética maior do que toda a região II da proteína. Em conjunto, os resultados obtidos sugerem que o sistema imune do hospedeiro é um importante fator de seleção de mutações relacionadas ao escape do parasito. Adicionalmente, avaliou-se a associação entre prevalência dos alelos DARC e suscetibilidade à infecção por P. vivax na Amazônia Legal brasileira. Com este objetivo foi desenvolvida uma nova metodologia de genotipagem de DARC baseada no PCR em tempo real. Este foi um dos primeiros estudos a evidenciar uma associação significativa entre indivíduos que expressam dois alelos DARC funcionais e maior suscetibilidade à infecção por P. vivax e o primeiro a caracterizar o padrão de variabilidade genética da DBPII em isolados de P. vivax do Brasil.

Estudo da variabilidade de isolados de Plasmodium vivax de áreas endêmicas na Amazônia Brasileira

A malária humana é causada por protozoários do gênero Plasmodium. Atualmente, mais de 2 bilhões de pessoas estão sob risco de contrair malária sobretudo em áreas tropicais e subtropicais. No Brasil, a malária está concentrada na região da Amazônia Legal, onde se registram mais de 99% dos casos, sendo cerca de 80% causados pelo Plasmodium vivax. Estratégias efetivas de combate ao parasito são essenciais para o controle da doença, e estas dependem do entendimento de diversos fatores como, por exemplo, a variabilidade genética e a estrutura populacional do P. vivax. Desta maneira, os marcadores moleculares são importantes ferramentas que podem auxiliar na elucidação destes aspectos biológicos do parasito. Contudo, poucos marcadores moleculares estão disponíveis para estudos populacionais de P. vivax, comparado ao P. falciparum, principalmente marcadores neutros ou quase neutros, ideais para esse tipo de estudo. Portanto, o objetivo deste trabalho foi identificar novos microssatélites em P. vivax e realizar análises de genética de população em isolados de cinco áreas da Amazônia Brasileira utilizando esses microssatélites e os cinco marcadores do tipo TR mais polimórficos descritos na literatura. Deste modo, uma busca in silico foi realizada utilizando o rascunho do genoma do parasito, e foram selecionados microssatélites com unidades repetitivas variando de 2 a 4 pares de base. Cada locus foi amplificado utilizando iniciadores específicos, incluindo os TRs cujos iniciadores foram baseados na literatura. O DNA molde para a realização da amplificação foi extraído de pacientes com infecção aguda de P. vivax.

Os produtos amplificados foram analisados em seqüenciadores automáticos de DNA utilizando programas de análise de tamanhos de fragmentos. As análises de genética de população foram realizadas utilizando vários pacotes computacionais. Ambos marcadores detectaram uma alta diversidade nas populações estudadas. Porém, algumas diferenças foram identificadas nas análises com cada tipo. de marcador molecular, dentre elas: as populações geneticamentes próximas foram diferentes juntamente com o padrão de desequilíbrio de ligação em cada população e a taxa de multiplicidade de infecção também variou entre os tipos de marcadores Além disso, foi possível, utilizando os microssatélites, estruturar as populações, o que não ocorreu utilizando os TRs. Por fim, foi possível perceber que os microssatélites se mostraram mais polimórficos, mais bem distribuídos pelo genoma do parasito e ainda. assim, o seu mecanismo de manutenção de variabilidade é conhecido, logo, eles aparentam ser mais aptos na utilização de estudos de genética de população de P. vivax

Duffy Binding Protein: Análise da diversidade genética em isolados do Plasmodium vivax da Amazônia Brasileira

A invasão dos eritrócitos pelos merozoítos de Plasmodium vivax requer a interação da Duffy binding protein (PvDBP) com o receptor DARC na superfície dos eritrócitos humanos. Esta interação parece ser essencial na formação de uma junção irreversível entre as membranas do merozoíto e da célula do hospedeiro, uma etapa chave no processo de invasão dos eritrócitos. Diante disso, a PvDBP é considerada uma das mais importantes candidatas para compor uma vacina anti-P. vivax. O domínio de ligação da PvDBP (região II, PvDBPII) ao seu receptor é rico em resíduos de cisteína e constitui a região mais polimórfica da proteína. Embora a maioria dos aminoácidos envolvidos na interação PvDBPII-DARC seja invariável, a resposta imune que parece ser direcionada principalmente contra regiões polimórficas da PvDBPII é capaz de bloquear a interação proteína-receptor. Como esta diversidade genética pode comprometer a eficácia de uma vacina que inclua este antígeno, o objetivo principal deste trabalho foi caracterizar o padrão de diversidade do domínio de ligação da Duffy binding protein de isolados de P. vivax de várias regiões da Amazônia Legal brasileira. Utilizando ferramentas estatísticas adequadas, evidenciou-se o papel da recombinação e da seleção natural na geração e manutenção da diversidade genética na PvDBPII.

Em adição, a seleção positiva parece agir em codons individuais da proteína, preferencialmente nos epitopos de células T e B da PvDBPII. Em geral, estas regiões apresentam uma diversidade genética maior do que toda a região II da proteína. Em conjunto, os resultados obtidos sugerem que o sistema imune do hospedeiro é um importante fator de seleção de mutações relacionadas ao escape do parasito. Adicionalmente, avaliou-se a associação entre prevalência dos alelos DARC e suscetibilidade à infecção por P. vivax na Amazônia Legal brasileira. Com este objetivo foi desenvolvida uma nova metodologia de genotipagem de DARC baseada no PCR em tempo real. Este foi um dos primeiros estudos a evidenciar uma associação significativa entre indivíduos que expressam dois alelos DARC funcionais e maior suscetibilidade à infecção por P. vivax e o primeiro a caracterizar o padrão de variabilidade genética da DBPII em isolados de P. vivax do Brasil.

Duffy blood group genotypes among African-Brazilian communities of the Amazon region

Duffy blood group genotype was studied in 95 unrelated subjects from four African-Brazilian communities of the Amazon region: Trombetas, Pitimandeua, Curiaú, and Mazagão Velho. Genotyping was performed using an allele-specific primer polymerase chain reaction technique for determining the three major alleles at FY blood group, and as expected, FY*O allele was the most common one, with frequencies ranging from 56.4% in Mazagão Velho to 72.2% in Pitimandeua, whereas the FY*O/FY*O genotype was found with frequencies between 32.3% in Mazagão Velho and 58.8% in Curiaú. Genotype and allele distributions in the four Amazonian communities are consistent with a predominantly African origin with some degree of local differentiation and admixture with people of Caucasian ancestry and/or Amerindians. These results reveal that the impact of the FY*O/FY*O genotype on the transmission and endemicity of the vivax malaria deserves to be investigated in full detail in an attempt to identify the contribution of host biological factors and explain the non-homogeneous prevalence of malaria in the region expressed by its different levels of exposure

Apical membrane antigen-1 (AMA-1) gene sequences of re-emerging Plasmodium vivax in South Korea

Plasmodium vivax malaria re-emerged in South Korea in 1993, and epidemics continue since then. We examined genetic variation in the region encompassing the apical membrane antigen-1 (PvAMA-1) of the parasites by DNA sequencing of the 22 re-emerging P. vivax isolates. The genotype of the PvAMA-1, which was based on sequence data previously reported for the polymorphic regions, showed that two haplotypes were present at one polymorphic site. Compared with reported data, the two types, SKOR type I and type II, were similar to Chinese CH-10A and CH-05A isolates, respectively. Thus, the present study showed that two genotypes of AMA-1 genes coexist in the re-emerging Korean P. vivax.

Serotyping of Duffy blood group in several Thai ethnic groups.

Duffy blood groups were serologically investigated in 434 individuals from Black Lahu (N = 54), Shan (N = 62), Lisu (N = 74), Red Karen (N = 112), White Karen (N = 102) and Manni (N = 30) in Thailand. High frequency of Fya (0.917-1.0) which is comparable with other Mongoloid populations was observed. The presence of weak-Fya antigen was detected in eight individuals of northern ethnic groups.